質粒小量快速提取試劑盒

Rapid Mini Plasmid Kit

產品信息：

保存條件：本試劑盒在室溫儲存 18 個月不影響使用效果。

產品介紹：

本試劑盒采用改進 SDS-堿裂解法裂解細胞，離心吸附柱內的硅基質膜在高

鹽、低pH 值狀態下選擇性地結合溶液中的質粒 DNA，再通過漂洗液將雜質和

其它細菌成分去除，后低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈質粒 DNA 從硅

基質膜上洗脫。

產品特點：：

1. 離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極

小，可重復性好?？朔藝a試劑盒膜質量不穩定的弊端。

• 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯+#仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。獲得的質粒產量高、純度好， 可以直接用于酶切、轉化、PCR、體外轉錄、測序等各種分子生物學實驗。

注意事項：

• 第--次使用時，將試劑盒所帶的全部 RNase A 加入溶液 P1 后（終濃度 100ug/ml） 于 2-8℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活，提取的質粒可能會有微量 RNA 殘留， 在溶液 P1 中補加 RNase A 即可。
• 環境溫度低時溶液 P2 中 SDS 可能會析出渾濁或者沉淀，可在 37℃水浴加熱幾分鐘， 即可恢復澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。
• 避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH 值變化。
• 本試劑盒適用菌株為 XL-1 Blue 和 DH5a 等核酸酶含量低缺陷型菌株。所用菌株為JM 系列、HB101 等 endA 菌株或野生型菌株，核酸酶含量豐富，應購買本公司生產的高純度質粒小量快速提取試劑盒。
• 溶液 P3 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。提取質粒的量與細菌培養濃度、質粒拷貝數等因素有關。一般高拷貝質粒，建議接種單菌落于 1.5-4.5ml 加合適抗生素的 LB 培養基，過夜培養 14-16 個小時，可提取出多達 20µg 的純凈質粒。如果所提質粒為低拷貝質?；虼笥?/font> 10kb 的大質粒，應適當加大菌體使用量，使用 5-10ml 過夜培養物，同時按比例增加 P1、P2、P3 的用量，其它步驟相同。
• 得到的質粒 DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD₂₆₀ 值為 1 相當于大約 50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶，也可能為 2 條或者多條 DNA 條帶，這主要是不同程度的超螺旋構象質粒泳動位置不一造成，與提取物培養時間長短、提取時操作劇烈程度等有關。本公司產品正常操作情況下基本超螺旋可以超過 90%。

7. 洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA，不影響下游酶切、連接等反應。也可以使

用水洗脫， 但應該確保 pH 大于 7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫質粒

應該保存在-20℃。質粒DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫

（10mM Tris-HCl，1mM EDTA， pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應，

使用時可以適當稀釋。

自備試劑：無水乙醇

操作步驟：

提示：

ð 第--次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指+#定量無水乙醇，充分混勻，加入

后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

ð 將 RNase A 全部加入溶液 P1 中，混勻，每次使用后置于 2-8℃保存。